在进行Western Blot实验时，最令人头疼的问题是什么？是条带漂移、数据崩溃，而进一步检查发现竟然是内参的选择失误！简单来说，内参就像细胞内的“稳定工作者”，其表达量稳定不变，专门帮助校正样品量、消除误差。没有合适的内参，半定量结果就犹如没有秤砣的秤——完全依赖运气！

首先，来看分子量的选择——当目的蛋白与内参的分子量差异超过5kD时，条带就不容易叠加在一起。其次，在核蛋白实验中，使用β-actin作为内参就不合适，因为核内根本没有β-actin！此时使用PCNA（29kD）或Histone H3（17kD）会更加合适。

对于样本类型，了解各组织的特点是非常重要的——在脂肪组织中，β-actin的表达量可能会非常低，此时建议直接使用GAPDH；而在肌肉样本中，使用tubulin可能会出错，此时选择actin反而更为稳妥。值得注意的是，同样的β-actin，在心肌组织中，N端抗体可能会消失，但C端抗体却能稳定地得到条带！因此，在购买抗体之前，一定要仔细确认抗原位点，确保“组织特异性”不会导致意外结果。

总结一下，针对不同样本的内参选择原则如下：全细胞和胞浆样本使用β-actin或GAPDH；核蛋白则选择PCNA或Histone H3；大分子蛋白应选择β-tubulin；而对于特殊样本，建议先查阅相关文献再进行购买！只有选对内参，Western Blot实验的结果才能更加可靠，尊龙凯时一直致力于为科研工作者提供高质量的产品，助力您的实验稳中求胜！