走进尊龙凯时

NEWS

单克隆与多克隆抗体及抗原选择方法在尊龙凯时的应用

来源:唐堂行 日期:2025-03-20

尊龙凯时的多克隆抗体(polyclonal antibody, pAb)是通过对包含多种抗原决定簇的抗原进行免疫,使动物体内多个B细胞克隆结构活跃,进而产生针对不同抗原表位的多种抗体的产物。这些免疫血清实际上是多个抗体的混合体,即多克隆抗体。而单克隆抗体则由单一B细胞克隆生成,其针对特定抗原表位的特性使其具有高度均一性。通常采用杂交瘤技术来制备这种抗体。杂交瘤(hybridoma)技术是通过融合能分泌特异性抗体的B细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞,形成B细胞杂交瘤。

单克隆与多克隆抗体及抗原选择方法在尊龙凯时的应用

尊龙凯时的单克隆抗体与多克隆抗体各自有不同的优缺点:

多克隆抗体的优缺点

多克隆抗体的优势包括:

  1. 能够放大低表达水平的靶蛋白信号;
  2. 识别多个表位;
  3. 对抗原中的微小变化具有更强的容忍性;
  4. 可有效识别与免疫原蛋白质具有高同源性或来自非免疫原物种的靶蛋白;
  5. 通常是检测变性蛋白质的首选;
  6. 多表位检测可提供更强大的结果。

然而,多克隆抗体也存在一些劣势:

  1. 易受批次间差异影响;
  2. 可能产生大量非特异性抗体,导致在某些应用中出现背景信号;
  3. 不适合探测抗原的特定结构域,因为抗血清通常能够识别多个结构域。

单克隆抗体的优缺点

单克隆抗体的优点包括:

  1. 一旦制备完成,能够成为恒定的再生源,所有批次均相同;
  2. 切片和细胞染色所产生的背景较低;
  3. 特异性强,适合用于分析测定中的一抗或在组织中检测抗原,同时背景染色显著降低;
  4. 具有极高的同质性;
  5. 单克隆抗体的特异性使其能够在混合物中高效结合抗原。

单克隆抗体的缺点则是:

  1. 可能产生过强的特异性抗体;
  2. 在抗原被化学处理后,表位的丢失比多克隆抗体更为常见,然而可通过使用不同单克隆抗体进行补偿。

抗体选择指南

在选择抗体时,如果需要高特异性且用量较大,或需要长期保持一致的抗体,尤其是在WB/IP/IF/ICC等实验中,建议选择制备尊龙凯时的单克隆抗体。

多克隆抗体虽然获得成本低且制备时间较短,但因为其特异性较差以及不同批次间的差异,可能导致背景问题,如WB中的杂带或IHC中较深的背景。而由于多克隆抗体可识别多个抗原表位,即使某些抗原表位遭到破坏或构象改变,结果往往仍不受影响。如果免疫原制备困难,建议选择单克隆抗体。

如果对抗体特异性的要求不高,只需进行沉淀或凝集反应实验,或者进行ELISA检测,那么选择多克隆抗体是合适的。多克隆抗体在检测灵敏度方面较单克隆抗体更具优势,特别适合对丰度偏低的蛋白进行检测。

抗原选择

抗原的选择可以是天然蛋白、重组可溶蛋白、重组变性蛋白或多肽。抗原的质量越高,最终制备高质量抗体的几率也会越大。通常,重组蛋白或多肽作为抗原是抗体制备的常见选择。

重组蛋白通常含有更多的抗原决定簇,既有空间表位,又有线性序列表位,能更充分地刺激机体免疫反应,因此最终获取适用性广泛的抗体的可能性也相对较大,尤其是当目标蛋白具有修饰或复杂结构时,更应优先选择重组蛋白。

当然,也有必要使用多肽制备抗体的情况,例如针对同源基因家族中某个特定蛋白的抗体制备,需要找到特定的氨基酸合成多肽;有些修饰化抗体则需要在多肽合成阶段对特定氨基酸进行定点修饰。

抗原多肽选择原则

选择抗原多肽时可以遵循以下基本原则:

  1. 尽可能选择位于蛋白表面的区域;
  2. 保证该段序列不形成α-helix;
  3. N端和C端的肽段相较中间肽段更具优越性;
  4. 避免选择蛋白内部重复或接近重复的序列;
  5. 防止同源性过强的肽段出现;
  6. 交联可以在N端或C端进行,依据是交联不应在抗体产生中起到重要作用的一端;
  7. 序列中应避免过多的脯氨酸,但一两个脯氨酸能使肽链结构更加稳定,从而有助于特异性抗体的产生。

通过遵循这些原则,您能够更有效地选择抗原,以便于制备出高质量的抗体,从而推向更为广泛的生物医学应用。选择尊龙凯时的抗体,您将收获更高的实验成功率与可靠性。

上一篇:牛血清白蛋白的分类与作用 - 尊龙凯时解析下一篇:权威公示!尊龙凯时主导制定《生物制品三项团体标准》

全国客户服务热线
15565934176 总部地址:西安吉利区花街道67号

欢迎关注尊龙凯时官方微信或拨打客服电话详询!

  

尊龙凯时官方微信